腺相关病毒(Adeno-virus,AAV)是一种无被膜、具有20面体结构的细菌,含有4.7kb的线状单链DNA基因组。AAV具备宿主范围广、安全性高、免疫原性低、长期稳固表达等特点,是一种理想的基因治疗工具,广泛应用于各类领域的基础研究与临床实验中。
JV065
CMV-MCS-3flag-T2A-
mRNA过表达,非融合
JV066
CMV-MCS-T2A-
mRNA过表达,非融合
JV067
CMV-DIO-MCS-T2A-
cre诱导mRNA过表达,非融合
JV069
EF1-MCS-CMV-EGFP
mRNA过表达,非融合
JV070
EF1-MCS-3flag-T2A-
mRNA过表达腺病毒包装技术,非融合
JV074
CAG-MCS-3flag-T2A-
mRNA过表达,非融合
JV075
CAG-MCS-T2A-
mRNA过表达,非融合
JV076
CAG-DIO-MCS-T2A-
cre诱导mRNA过表达,非融合
JV077
hSyn-MCS-T2A-
神经元特异性启动子,mRNA过表达
JV078
hVGAT-MCS-3flag-T2A-
GABA能细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV079
-MCS-T2A-
谷氨酰胺能血管细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV080
CD68-MCS-T2A-
小胶质细胞细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV081
/GFAP-MCS-T2A-EGFP
星胶细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV082
TIE-MCS-T2A-
内皮细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV083
SM22a-MCS-T2A-
平滑肌细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV084
TNT-MCS-3flag-P2A-EGFP
心肌细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV085
SP-C-MCS-T2A-
肺上皮细胞特异性启动子,mRNA过表达
JV086
TBG-MCS-3flag-P2A-
肝脏特异性启动子腺病毒包装技术,mRNA过表达
JV087
rpe65-MCS-T2A-
视网膜特异性启动子,mRNA过表达
JV088
FABP4-MCS-T2A-
脂肪特异性启动子,mRNA过表达
采用三质粒共转染的-free系统在293T细胞中进行AAV的制造与包装,并成立了建立的制备与质控方法,生产的AAV颗粒可直接应用于各种体内体外试验。
腺相关病毒优势:
1.宿主范围广:可传染分裂细胞与非分裂细胞;多种亚型具有多种组织亲嗜性,可以应用于脊髓系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。
2.扩散性佳:体积小、滴度高,具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性,可重生血脑屏障,是优秀的血管元与胶质细胞感染工具。
3.安全系数高:迄今未看到野生型AAV对身体致病;ITR与rep/cap基因分别由独立的底物传导表达,进一步消除感染风险。
4.免疫原性低:仅4.7kb的基因组便于重组DNA科技操作,在动物试验中局部大用量使用很少引起非特异性反应与免疫抑制。
5.长时稳定表达:AAV感染可介导外源基因发生低频(
6.稳定性好:AAV在60℃不会被灭活,能抵抗多种有机醇类的处理(比如乙醇)
不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性,我们推荐根据试验靶向的肾脏/细胞,选择带有相应亲和性的AAV亚型进行探索,能够有效提升感染效率。
服务流程:
1.方案沟通
2.基因克隆:将目的基因cDNA(Geneof)形成入我们的专有AAV转移质粒,测序验证
3.病毒包装:三核酸共转染(转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒)入293T细胞
4.收毒:72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒
5.纯化浓缩:碘克沙醇梯度离心,高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质,将具有传染力的病毒富集到90%以上;超滤浓缩
6.质量控制:
-多重酶切质粒鉴定
-qPCR检测病毒抗体
-SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度
-细胞转导测试(带有荧光标签)
-HPLC/内毒素检测/微生物测定(高浓度AAV可选)
交付内容:
定制AAV病毒颗粒
对照病毒(可用于转导测试)
详细实验报告