1.细胞的准备
a)复苏293细胞，传代培养1-2代，调整好细胞状态，务必4代以内完成转染实验。
b)在转染前1天，用胰酶消化传代，将5×105细胞接种于6孔板或87.5px皿中，加入2ml完全培养基（DMEM+10%FBS+1%P/S+1%），摇匀后放入5%CO2、95%湿润空气、37℃培养箱中培养，以确保次日转染时细胞浓度达70%左右。
2.转染
a)转染当天，从293细胞中移除培养基，分别换上新鲜的1.8mlDMEM+10%FBS培养基（不含抗生素），37℃孵育2h。
b)配制转染试剂混合物
c)使用转染试剂：
d)A管：将4ugDNA与（基本），混匀；
e)B管：将与（基本），混匀；
f)室温放置5min后，将A管与B管溶液混和，轻轻混匀室温孵育15-20min；
g)将上述复合物均匀滴加到293细胞中，轻轻摇匀细胞培养板，37℃培养箱中孵育。
3.腺病毒包装
a)转染24-48h后观察细胞状态，若质粒带荧光，可荧光显微镜下观察转染效率，此时荧光率约10-70%。细胞浓度低于>90%需进行转盘，用胰酶消化细胞全部传到250px细胞培养皿中。
b)之后经常观察细胞状态腺病毒包装技术，每隔2天换一次培养基，每次换液8ml，直至有病斑（CPE）发生，之后换液采取半换即留3ml，再补5ml。
c)传代后的第7-10天，细胞在10cm培养皿中出现60%的CPE，大部份细胞崩解碎裂，将细胞和培育液全部收集。
4.腺病毒粗液的合成
a)将收获的装有细胞培养上清及细胞碎片的离心管放于-80°C冰箱中。30min后，将管子放置于37°C水浴锅中，解冻15min，如此反复冻融两次以裂解细胞。
b)将反复冻融的病毒液4℃离心15min，去除细胞碎片。
c)将病毒粗提液1ml/管分装于1.5ml离心管中，保存于-80°C冰箱。
5.3.5腺病毒液浓缩
a)将上一方法的病毒上清用0.45um的丁酸纤维素膜过滤，在过滤病毒液之前先用5mlDMEM完全培养基过滤润湿滤膜，以避免滤膜对细菌蛋白的吸收。
b)将过滤以后的病毒液腺病毒包装技术，置于高速离心管中，4℃，，离心2h。
c)离心完毕后，将离心管拿回安全柜中，小心倾倒上清，将离心管倒扣在吸水纸上晾干残液。
d)取1ml预冷的DMEM，依次加入到离心管中，用剪去尖头的枪头，重复多次地半量吹打沉淀，轻柔操作，将离心管上方的沉淀完全重悬于DMEM溶液中，再用１mlDMEM润洗各管一遍，共得2ml病毒浓缩液。
e)每管100ul小量分装与病毒专用管中，置-80度保存。
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