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01腺病毒简介
腺病毒是一种无包膜的病毒颗粒，直径约为70～90纳米，其基因组为线状双链DNA，含有约35000个碱基对，并在两端各有长约100碱基对的反向重复序列。
我们常用的是5型血清型腺病毒，它缺失了早期表达基因序列E1区和E3区。由于缺失E1区，腺病毒无法自我复制，需依赖包装细胞（如HEK293细胞）提供反式互补进行复制，确保了腺病毒的安全性。去除E3区可减少宿主体内免疫反应。
我们使用AdMax系统进行腺病毒的包装，通过Cre-loxp重组酶作用，使得腺病毒载体在HEK293细胞中产生重组腺病毒，滴度可达1×10^12pfu/ml。
腺病毒载体提供多种启动子选择，如CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a等，同时提供多种荧光标记蛋白，如EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等，以满足实验需求。
腺病毒包装是一种实验技术，其核心原理是将目标基因组嵌入到腺病毒载体中，随后利用包装细胞将这个载体转变为完整的、能够感染细胞的腺病毒颗粒。具体操作包括选择适当的腺病毒载体、插入目标基因组、转染包装细胞、腺病毒复制和包装、收集腺病毒、评估包装效率等步骤。这一技术被广泛应用于生产用于基因转染、基因敲除、基因沉默等实验所需的腺病毒。
实验原理图
实验
腺病毒包装是一项关键的实验技术，其原理涉及以下几个步骤：
选择载体：选择适合携带目标基因的腺病毒载体，其中包含腺病毒的基本结构基因和调控元件。
插入基因组：将目标基因组插入到腺病毒载体 中，通常通过分子生物学技术完成，如限制性酶切和连接、PCR扩增等。
转染细胞：将构建好的载体转染到包装细胞中，如HEK293细胞，这些细胞具有高效的腺病毒包装能力。
复制和包装：腺病毒载体进入包装细胞后，其中的腺病毒基因组被复制和转录，产生腺病毒基因产物，并将目标基因组表达并包装到腺病毒颗粒中。
收集腺病毒：包装细胞释放出大量的腺病毒颗粒到培养液中，通过离心等方法收集腺病毒颗粒。
评估效率：对收集到的腺病毒进行浓缩和纯化，并评估其包装效率和滴度。
腺病毒包装技术可用于产生大量的目标基因表达腺病毒，用于基因转染、基因敲除、基因沉默等功能研究。
实验流程图
样品类型一：
冻干细胞
样品需求：
1.取对数生长期的细胞，消化离心收集细胞，加入冻存液吹打混匀，装入冻存管，标明细胞名称/细胞代效，冻存维胞数量在 1-5*106个/ml。
冻存细胞
2.项目启动后细胞复苏，复苏后3天反馈细胞状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7 天反馈支原体污染情况。
3.细胞详细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息）
保存条件：
氮液
运输条件：
干冰
样品类型二：
复苏后细胞
样品需求：
1.使用 T25 培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上，装满培养液，只留纽扣大小的气泡，瓶口用封口膜封好，标明细胞名称/细跑代数/接种时间/培养基类型，瓶子固定运输.
2.收到细胞后3天反馈细脆状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7 天反馈支原体污染假况。
3.细胞洋细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息）
保存条件：
常温
运输条件：
常温
样品类型三：
质粒
样品需求：
1.纯脱高，无内表素，无蛋白质，基因組 DNA/RNA 污染，质粒 A260:A280 的比硫在18-2.0之间
2.浓度不低于0.5μg/μl，总量大于100μ9，无内毒素处理
3.载体洋细信息，包括名称、大小、抗性、荧光标记
保存条件：
-20摄氏度
运输条件：
冰袋
样品类型四：
病毒
样品需求：
1.提伤毒：漢原不低于1*108TU/ml，体积约 200ul，标明制备时间，且没有反复冻融
2.腺病毒：滴度不低于 1*109PFU/ml，体积约 200ul，标明制备时间，且没有反复东融
3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类，最好需要提供病毒载体图谱
保存条件：
-80摄氏度
运输条件：
干冰
备注：所有样本均需有唯一标志，且标记清晰可识
交付标准：
滴度:>108TU/ml
规格:1ml
赠送阴性对照病毒规格:0.2ml（>108TU/ml）
过表达腺病毒感染原代大鼠神经元细胞图片
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