01Adv包装系统
和AdMax包装系统是现在使用非常多的腺病毒包装系统。AdMax包装系统因操作简便、重组率高、产毒率高，成为腺病毒主要的包装系统。下图是AdMax和系统的示意图：
AdMax系统
系统
有了包装系统，腺病毒又是如何包装呢？…………..
02Adv包装流程
腺病毒包装完成后，如何进行质控？……
03Adv质控1.Adv纯化
现在常用的病毒纯化步骤是CsCl密度梯度超速离心法和碘克沙醇浓度梯度超速离心法。碘克沙醇是一种造影剂，具有非离子型、对细胞无毒和排泄惰性等特点，利用不同颗粒之间存在沉降系数差，在必定离心力作用下，颗粒各自以一定速率沉降，会在体积梯度区域上产生不同区带，从而起到纯化的目的。下图是Adv病毒经碘克沙醇浓度梯度超速离心纯化后的示意图：
2.Adv滴度检测
维真生物Adv病毒抗体常用的监测方式：QPCR法、孔稀释法和快速腺病毒抗体免疫诊断法。
滴度标定法
原理
滴度单位
用途
QPCR法
用腺病毒基因组特异性底物进行QPCR。在定量曲线的线性范围内，Ct值与已知拷贝数质粒Ct值的比率，即为病毒基因组的初始拷贝数
vp/ml(物理单位)
预制腺病毒库中病毒的滴度标定
孔稀释法
数荧光
pfu/ml(生物学单位)
带荧光腺病毒的效价测定
免疫法
通过抗腺病毒抗原与传染了腺病毒供试样品的细胞结合，再用辣根过氧化物酶标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞显示出显著的棕色，通过计数及计算，测定腺病毒抗体
pfu/ml(生物学单位)
该办法不受荧光限制，适用于所有腺病毒抗体的检测
上面介绍了腺病毒的基本常识，下面给你们讲讲Adv应用………….
04Ad5应用
Ad5型第一代腺病毒是目前应用最为广泛的腺病毒基因递送工具腺病毒包装技术，具有广泛的组织亲嗜性，特征明确的基因组，可允许较大外源基因插入，固有佐剂特性，诱导强的转基因特异性免疫反应，宿主内复制缺陷性或者易大体量生产的特征，因此有相当广泛的应用范围，不仅适于体内外感染细胞，也可用于疫苗研发和基因诊断领域，特别是疾病基因诊断。下面重点介绍一下Ad5用于体外细胞感染和在疫苗研发中的应用。
1.体外细胞感染①按照实验需求接种一定产量的生长状况良好的目的细胞，并在传染腺病毒前更换新鲜的培养基。②根据目的细胞的绝佳MOI值，吸取适当的病毒加入目的细胞中。目的细胞的绝佳MOI值会因细胞种类不同而差异巨大。对于易感染的细胞，所用MOI值一般在10至100；难感染的细胞，病毒的MOI会高达1000。为了确认细胞的绝佳MOI值，小V建议您通过倍比稀释实验探索以及查阅文献。病毒用量的推导公式：病毒用量pfu=最佳MOI×细胞数量例如：如果目的细胞的最佳MOI=10，感染106细胞,需要10E7pfu的病毒。如果病毒的效价为1×10E10pfu/mL,需要加1μl病毒液。③病毒感染后6-12h，小V建议替换新鲜培养基。在24-48h，或者您指定的时间点观察基因的表达。
应用示例：
腺病毒传染人口腔膜干细胞2.疫苗开发
COVID-19疫情已大幅近十年，为了彻底打赢这场攻坚战，科学家们正在专注研制新冠疫苗，开发方向包含细菌载体疫苗、核酸疫苗、重组蛋白疫苗和灭活疫苗。CCTV报道，军事医学科大学与康希诺生物合作开发的重组腺病毒载体COVID-19疫苗已完成I期临床研究。该公司开发的另一款疫苗Ad5-EBOV疫苗已于2017年10月获批，将转基因递送给细胞自噬从而构建免疫功能，是一种较为成熟的疫苗技术路线。小V相信，经过科学家的执着努力，战役的胜利曙光很快还会到来！
(图片来源网络)05应用
Ad5型腺病毒对细胞的传染效率主要取决于靶细胞表层柯萨奇病毒受体（,CAR）的表达量，但是在这些细胞种类，如原代肿瘤细胞、干细胞、树突状细胞等细胞表层CAR表达量低，因此Ad5型腺病毒对这些细胞的传染效率低下腺病毒包装技术，从而限制了Ad5型腺病毒的广泛应用。Ad35是一种识别CD46的B亚群腺病毒，CD46在人CD3+T细胞上高表达，用Ad35的纤维基因替换Ad5的纤维基因，生成了嵌合腺病毒载体，增强了与受体的结合能力并且对T细胞的感染效率，从而有更广阔的应用空间。
下图是感染K562和CD34+细胞的结果，与Ad5相比感染效率明显提升。
(OF,Mar.2000,p.2567-2583)
