、从NCBI网站上查找相应基因（如小鼠KL14基因）的编码区，即CDS序列。2、根据KLF14CDS设计相应的引物，PCR来测序KLF14的编码序列，即KLF14的cDNA3、将扩增出来的cDNA序列连接到PGEM-Teasy载体，蓝白斑筛选，挑取白斑摇菌，提质粒，EcoRI酶切鉴定，然后送测序4、测序正确后用限制性内切酶把cDNA切出来连接到.1载体(很重要的一种表达载体)上，做报告基因试验。5、双荧光报告基因测试其对下游的靶基因启动子有作用之后，用适合（和XhoI）的限制性内切酶将连接到.1上的KLF14cDNA切出来，凝胶回收，同时也切-CMV回收。把KLF14cDNA连接到-CMV载体上。6、在包装腺病毒之前要先用检测一下连接到-CMV的KLF14的cDNA能否表达出蛋白。把第5步连接好的引物用小鼠试剂转染293A细胞，然后收细胞（RAPI裂解液，加蛋白酶诱导剂），提取蛋白，做，杂标签抗体（Myc或Flag）。
只有在293A细胞有表达之后才可以再次包装。7、在第5步最好多提取一些连接好的KLF14cDNA-CMV质粒，浓度高点。然后用PmeI酶切，让这个底物线性化（大约要切10ug左右，50ul的模式）。然后跑胶回收切开的质粒，一般PmeI都可以完全切开，大概要回收3-4ug。8、将回收的线性化产物加入到感受态细菌中（该病毒中已经含有-1质粒），电转换让其出现重组。然后在抗性的平板上筛选，就按通常的热激，涂板的方式转换就可以。因为重组后的-CMV-KLF9+-1特别大，大约41.5kb，所以要差不多在37度细菌孵箱中生长16-20h才可以，即使长出菌落，也是相当小的这种。非常大的菌落肯定不是重组上的。抗性平板上筛选腺病毒包装技术，是由于-CMV质粒上有Kan抗性，-1则没有任何抗性。理论上讲只有重组上的质粒才有也许在有Kan抗性的平板上长出菌落。1/29、挑取小芽孢，提取质粒，然后用PacI酶切，鉴定是不是重组的底物。酶切鉴定时要修改两个对照，一个-CMV-KLF9（约11kb），另一个-1（约34.4kb），重组质粒大约41.5kb。
将这三个质粒都用PacI酶切。①-CMV-KLF9含有两个PacI酶切位点，会切出3kb和8kb两条带②-1只带有一个PacI酶切位点，跑胶时只会有一条非常大的带34.4kb③重组的底物也有2个PacI酶切位点，切开后会有两条带，一条和①中的一样3kb左右，另一条则是十分大的一条带，比②中的条带还大，或者差不很大10、鉴定正确之后，将从菌株中提取的引物，转化到DH5a感受态中大量扩增。然后提取质粒，浓度也不会太高。（电转之后的菌株不能保存菌种的）。将提取的重组质粒用PacI切，让它线性化，一般要切10ug，50ug体系37度酶切8h以上。然后加3倍重量的无水酒精-80℃沉淀过夜。之后，4℃，离心15min，弃去上清液，再用75%的乙醇清洁一次，晾干后用ddH2O溶解，不要煮沸太多，然后测回收的浓度。11、把回收到的线性化重组菌株用小鼠293A细胞(脂质体的自噬效率强)，转染的之后液体都要用无血清的DMEM培养基，转染完6h以后换液。
转染的之后293A状态要很高，密度在百分之七八十。（用细胞培养瓶，不能用培养皿）转染之后的3-4天不要动，之后经常可以观察一次有没有发生绿的噬菌斑，在此之后不能换液，只能一点一点的补加DMEM，直到细胞变的全部绿腺病毒包装技术，50%左右漂。12、等到细胞全绿之后，把培养瓶的细胞冲匀，离心，这是第一轮的病毒，利心丸的上清也要好好保留，细胞沉淀用PBS溶，然后液氮反复冻融3次，让病毒释放。用第一轮裂解的病毒上清感染293A得到第2轮的病毒。2/2
