1.腺病毒载体分类
第一代腺病毒载体：指E1或E3基因缺乏的腺病毒载体。
特点：
(1)外源基因容量为6.5-8Kb；
(2)适用于大多数基因治疗，且易于获得高滴度的病毒；
(3)可用于表达重组蛋白质或将外源基因导入对其它转染方法不敏感的细胞株中；
(4)若未经纯化使用，容易引起人体造成强烈的发炎反应和免疫反应，纯化后可安全使用。
第二代腺病毒载体：指E2A或E4基因缺乏的腺病毒载体。
特点：
(1)外源基因容量提高，可达14Kb；
(2)病毒蛋白表达减少，引发人体的免疫反应比第一代弱；
(3)外源基因表达时间较长；
(4)病毒数量较低腺病毒包装技术，且滴度增加。
第三代腺病毒载体：也称为空壳载体或辅助病毒载体，指全部或大部份腺病毒基因组缺乏，仅可保留ITR和包装信号序列的腺病毒载体。
特点：
(1)外源基因容量大力度加强，可达37Kb；
(2)无病毒蛋白表达，降低了人体的免疫反应，提高了安全性；
(3)外源基因可大量稳定表达；
(4)应该一个腺病毒突变体作为辅助病毒；
(5)可反复应用，无需考虑人体的抗腺病毒中和抗原的影响。
2.腺病毒载体包装方式
传统的双质粒共转染法
将插入了外源基因的穿梭载体转染与携带腺病毒遗传组的引物共转染293细胞，这两种构象在293细胞内通过随机的同源重组（同源序列的DNA分子之间以及分子之内的再次组合），形成重组腺病毒载体基因组腺病毒包装技术，并包装成病毒颗粒。
局限性：
(1)操作较复杂，因其易被亲代病毒污染，需经过多次纯化和鉴定；
(2)重组效率低，耗费时间较长。
注：此方式适用于临床。
(1)Ad-Easy法
将克隆了外源遗传的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒大部分遗传组的引物共转染RecA+细菌，在病毒RecA重组酶的功效下，经抗性筛选获得重组腺病毒遗传组引物，将其酶切纯化后扩增293细胞，包装成重组病毒颗粒。
特点：
(1)酶切和连接方法少，操作简便；
(2)可选用的穿梭载体多；
(3)同源重组率达60%以上，效率相对较高；
局限性：
(1)这种腺病毒基因易于出现突变；
(2)设备和技术要求较高。
AdMAX双质粒转染法——本公司采取手段
利用Cre/loxP重组酶系统在293细胞中取得重组细菌。将插入外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒大部分遗传组的引物共转染293细胞，并在Cre重组酶作用下重组，获得重组病毒颗粒。
特点：
(1)操作简单；
(2)不应该反复进行空斑纯化；
(3)目的基因表达水平高；
(4)重组效率高，比传统双质粒共转染法减少约100倍，若插入的外源基因小于8Kb，感染率几乎达100%。
