技术服务详细表述
汉恒生物病毒包装服务优势:
1.我们提供长期的预装基因腺病毒现货(比如p53基因,LC3基因,AKT基因等),方便科研工作者推进试验进程。
现货查询地址是:
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2.腺病毒,慢病毒,稳定株筛选速度全球领先;
3.滴度最高(腺病毒10^11腺病毒包装技术,慢病毒10^9)
4.服务品质一流:我们管理团队采取的是:技术支持+实验科技+产品经理三层管理模式,确保对用户的服务承诺。
简介:
慢病毒简介
慢病毒()载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展出来的基因诊断载体。具有感染谱广泛,可以有效感染分裂期和静止期细胞,长期稳定表达外源基因等特点,因此作为导入外源基因的有力软件。现在慢病毒系统尚未被广泛应用到各类细胞系的基因过表达,RNA干扰,研究并且活体动物试验中。
汉恒服务项目
汉恒生物技术(上海)有限公司提供慢病毒载体建立,RNAi(shRNA),miRNA,过表达和干扰慢病毒包装或者基于慢病毒技术的稳固细胞系形成服务。
整体实验流程
(一)实验步骤(1、2、3为并列步骤)
1.慢病毒过表达质粒载体的构筑设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,PCR(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(CDNA质粒以及文库)调取目的基因CDS区()连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。
2.慢病毒干扰核酸载体的构筑合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。
3.miRNA载体建立从中调取基因相应的Mir前体,并在调取引物中引入酶切位点。
4.慢病毒载体的包装与浓缩提纯制备慢病毒穿梭质粒以及辅助包装原件载体质粒,三种底物载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6h更换为完全培养基,培养48和72h后腺病毒包装技术,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
(二)流程图
提供产品:
最后提供1ml滴度>10^8PFU/ml,并免费提供对应的腺病毒对照。
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